|
马铃薯病毒和类病毒复合rt-pcr检测技术及应用
2007年度获河北省科学技术三等奖
技术领域：植物检疫技术
主要技术内容、技术经济指标：
本研究为省科技厅科技攻关项目：“马铃薯病毒和类病毒复合rt-pcr检测技术及应用(编号：04225505)”，2006年4月鉴定达国际先进水平。
针对我国脱毒种薯质量不高和elisa技术灵敏度低、准确性差、成本高等问题，以马铃薯卷叶病毒（plrv)、y病毒(pvy)、x病毒(pvx)、a病毒(pva)、s病毒(pvs)和纺锤块茎类病毒(pstvd)等为研究对象，研究建立了一种高效提取马铃薯总rna的方法即改良ctab法，为病毒分子检测提供高质量的rna；建立了一种以马铃薯线粒体nadh脱氢酶nad2基因为内对照复合rt-pcr快速同步检测5种马铃薯病毒和1种类病毒的技术体系，其中内对照可全程监控rt-pcr反应，有效地解决了rt-pcr易出现假阴性结果的问题，其核心技术已申报国家发明专利（专利受理号：200610156123.x），与elisa技术相比具有灵敏、准确、稳定、一次可同步快速检测多种病原、能检测类病毒和操作简便等优点；从分子水平上首次系统地对河北马铃薯病毒和类病毒流行株系进行了准确的鉴定，克隆了它们的部分基因序列并被国际基因库（genbank)收录，分别为plrv（dq315385）、pvy(ay660662)、pvx(dq315386)、pvs(dq315387)、pva(dq315384)和pstvd
(dq315388)，为病毒病害的防治奠定了基础，有关研究在园艺学报、华北农学报、河北农业大学学报等国家核心刊物发表论文9篇，并多次被同行引用。结合大田抗病毒育种，建立了一种分子检测辅助的马铃薯抗病毒快速育种技术体系，提高了抗病材料选择的准确性，加快了育种进程，先后育成河北省区试的抗病毒病新品种张薯97-12-101、98-14-40、99-4-44、99-4-57、99-4-59和国家区试品种99-4-40。该项技术从2004年起开始推广应用，在农业部薯类产品质量监督检验测试中心张家口中心和哈尔滨中心等全国9个检测和研究机构累计检测样品36万个，节本增效8638万元，通过新技术检测和监控生产的优质种薯在全国6省（市、区）推广面积达947.4万亩，较未检测种薯增产18%以上。
 |
